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產(chǎn)品資料

大鼠Sema3A檢測(cè)試劑盒

如果您對(duì)該產(chǎn)品感興趣的話,可以
產(chǎn)品名稱: 大鼠Sema3A檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品型號(hào): Sema3A
產(chǎn)品展商: HZbscience
產(chǎn)品文檔: 無相關(guān)文檔

簡(jiǎn)單介紹

大鼠Sema3A檢測(cè)試劑盒采用雙抗體夾心法:抗大鼠Sema3A單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的大鼠Sema3A會(huì)與單抗結(jié)合,游離的成份被洗去。加入酶標(biāo)抗體,抗大鼠Sema3A抗體與結(jié)合在單抗上的大鼠Sema3A結(jié)合而形成**復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物,若反應(yīng)孔中有大鼠Sema3A,辣根過氧化物酶會(huì)使無色的顯色劑現(xiàn)藍(lán)色,加終止液變黃。在450nm處測(cè)OD值,大鼠Sema3A濃度與OD450值之間呈正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的大鼠Sema3A檢測(cè)試劑盒濃度


大鼠Sema3A檢測(cè)試劑盒  的詳細(xì)介紹

大鼠Sema3A檢測(cè)試劑盒檢測(cè)原理:

本試劑盒采用雙抗體夾心法:抗大鼠Sema3A單抗包被于酶標(biāo)板上,標(biāo)本和標(biāo)準(zhǔn)品中的大鼠Sema3A會(huì)與單抗結(jié)合,游離的成份被洗去。加入酶標(biāo)抗體,抗大鼠Sema3A抗體與結(jié)合在單抗上的大鼠Sema3A結(jié)合而形成**復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物,若反應(yīng)孔中有大鼠Sema3A,辣根過氧化物酶會(huì)使無色的顯色劑現(xiàn)藍(lán)色,加終止液變黃。在450nm處測(cè)OD值,大鼠Sema3A濃度與OD450值之間呈正比,可通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中的大鼠Sema3A濃度。

選用世界有名生產(chǎn)廠家的原料,采用專業(yè)體外診斷試劑生產(chǎn)技術(shù)制造。適用于體外定量檢測(cè)大鼠血清、血漿或細(xì)胞培養(yǎng)上清液中天然重組大鼠Sema3A濃度。僅供科研使用,使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說明書并檢查試劑組分。

大鼠Sema3A檢測(cè)試劑盒組成:

中文名稱

英文名稱

規(guī)格

保存

ELISA酶標(biāo)板(可拆卸)

Micro ELISA  Plate(Dismountable)

8×12 / 8×6*

4/-20 #

凍干標(biāo)準(zhǔn)品

Reference Standard

2/1 *

4/-20 #

標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液

Reference Standard & Sample Diluent

1 20mL/12mL*

4

濃縮生物素化抗體

Concentrated Biotinylated Detection Ab

1 120μL/70μL*

4/-20 #

生物素化抗體稀釋液

Biotinytated Detection Ab Diluent

1 10mL/6mL*

4

濃縮HRP酶結(jié)合物

Concentrated HRP Conjugate

1 120μL/70μL*

4(避光)

酶結(jié)合物稀釋液

HRP Conjugate Diluent

1 10mL/6mL*

4

濃縮洗滌液(25×

ConcentratedWashBuffer (25×)

1 30mL/16mL*

4

底物溶液(TMB

Substrate Reagent

1 10mL/6mL*

4(避光)

反應(yīng)終止液

Stop Solution

1 10mL/6mL*

4

封板覆膜

Plate Sealer

5/3 *

 

產(chǎn)品說明書

Product  Description

 

質(zhì)檢報(bào)告

Certificate of Analysis

 

特別說明
*: [96T/48T](打開包裝后請(qǐng)及時(shí)檢查所有物品是否齊全完整)
#: 
一周內(nèi)使用可存于4℃,需長(zhǎng)時(shí)間存放或多次使用建議存于-20.              

相關(guān)試劑在分裝時(shí)會(huì)比標(biāo)簽上標(biāo)明的體積稍多一些,請(qǐng)?jiān)谑褂脮r(shí)量取而非直接倒出!

大鼠Sema3A檢測(cè)試劑盒樣品收集:

1. 血清:全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,無內(nèi)**試管。

2. 血漿:抗凝劑推薦使用EDTA-Na2,樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測(cè)。避免使用溶血,高血脂樣品。

3. 組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)

影響測(cè)量結(jié)果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。*后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測(cè)。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測(cè)。

5. 其它生物樣品:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè)

6. 樣品應(yīng)清澈透明,懸浮物應(yīng)離心去除。

7. 樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃,若不能及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),或-80℃(6個(gè)月內(nèi)檢測(cè)),避免反復(fù)凍融。

8. 如果您的樣品中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品*高值,請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況,做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn),以確定稀釋倍數(shù))。

試驗(yàn)所需自備物品:

1. 酶標(biāo)儀(450nm波長(zhǎng)濾光片)

2. 高精度移液器,EP管及一次性吸頭:0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL

3. 37℃恒溫箱,雙蒸水或去離子水

4. 吸水紙

大鼠Sema3A檢測(cè)試劑盒檢測(cè)前準(zhǔn)備工作:

1. 請(qǐng)?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,平衡至室溫。

2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋(1:25)。未用完的放回4℃。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,屬于正常現(xiàn)象,可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶完全溶解后再配制洗滌液(加熱溫度不要超過50℃,使用時(shí)洗滌液應(yīng)為室溫)。當(dāng)日使用。

3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 于10000×g離心1分鐘,加入標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液1.0mL至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,旋緊管蓋,靜置10分鐘,上下顛倒數(shù)次,待其充分溶解后,用移液器將其輕輕混勻。然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋(注:不要直接在反應(yīng)孔中進(jìn)行倍比稀釋)。建議配制成以下濃度:按照稀釋方法圖例 標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液直接作為空白孔0ng/mL。如配制5ng/mL標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5mL10ng/mL的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5mL標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液的EP管中,混勻即可,其余濃度依此類推。  

4. 生物素化抗體工作液:實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100μL/孔計(jì)),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘,以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體(1:100)成工作濃度。當(dāng)日使用。

5. 酶結(jié)合物工作液:實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量(以100μL/孔計(jì)),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制100-200μL。使用前15分鐘,以酶結(jié)合物稀釋液稀釋濃縮HRP酶結(jié)合物(1:100)成工作濃度。

當(dāng)日使用。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋方法圖例:(以500μL/管為例,也可根據(jù)實(shí)際用量來稀釋,如200μL/管)

 

洗滌方法:

任何一個(gè)成功的ELISA檢測(cè),正確的洗板方法是非常關(guān)鍵和重要的一方面。連貫的洗板也很有必要的。在稀釋濃縮洗滌液時(shí),請(qǐng)使用去離子水或者蒸餾水。

◆ 洗滌瓶或多通道移液器

保證洗瓶?jī)?nèi)壓強(qiáng)良好或者移液器的管頭被適當(dāng)調(diào)整并且無碎屑。檢查板內(nèi)的板條是否安好。將板條編號(hào)以防在傾泄的時(shí)候松動(dòng)便于調(diào)整。首先,傾泄酶標(biāo)板以清空內(nèi)容物。根據(jù)試劑盒內(nèi)推薦的體積向每孔內(nèi)滴加洗液。若實(shí)驗(yàn)步驟中要求浸泡,則定時(shí)將每孔浸泡完全。將板內(nèi)液體傾倒完全,用干凈紙巾擦拭。按照說明書所示重復(fù)以上步驟。*后一次洗板之后,將板內(nèi)液體傾倒完全,用干凈紙巾拍打表面并擦干。切勿讓孔內(nèi)干燥。按照試劑盒內(nèi)說明書迅速進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)操作。

◆ 自動(dòng)洗板儀

將自動(dòng)洗板儀接入適當(dāng)真空(根據(jù)制造商的說明)。確保每管都被適當(dāng)抽吸。首先,通過吸或者傾倒將板清空。根據(jù)試劑盒內(nèi)推薦的體積向每孔內(nèi)滴加洗液。若實(shí)驗(yàn)步驟中要求浸泡,則定時(shí)將每孔浸泡完全。完全抽吸各孔,保證沒有洗液殘留。在孔內(nèi)液體被完全抽走之后不要再將裝置至于孔內(nèi)過分抽吸。按照說明書所示重復(fù)以上步驟。*后一次洗板之后,將板內(nèi)液體傾倒完全,用干凈紙巾拍打表面并擦干。切勿讓孔內(nèi)干燥。按照試劑盒內(nèi)說明書迅速進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)操作。

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫;試劑或樣品配制時(shí),均需充分混勻,并盡量避免起泡。

1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。空白孔加標(biāo)準(zhǔn)品&樣品稀釋液 100μL,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品 100μL,注意不要有氣泡,加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。給酶標(biāo)板覆膜,37℃孵育 90 分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每個(gè)孔中加入生物素化抗體工作液 100μL(在使用前15 分鐘內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜,37℃溫育 1 小時(shí)。

3. 棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板 3 次,每次浸泡 1-2 分鐘,大約 350μL/每孔,甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干。

4. 每孔加酶結(jié)合物工作液(臨用前 15 分鐘內(nèi)配制)100μL,加上覆膜,37℃溫育30 分鐘。

5. 棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5 次,方法同步驟3。

6. 每孔加底物溶液(TMB)90μL,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15 分鐘左右(根據(jù)實(shí)際顯**況酌情縮短或延長(zhǎng),但不可超過30 分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時(shí),即可終止)。

7. 每孔加終止液 50μL,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物溶液的加入順序相同。

8. 立即用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)測(cè)量各孔的光密度(OD 值)。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源,預(yù)熱儀器,設(shè)置好檢測(cè)程序。

9. 實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存。

大鼠Sema3A檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng):

◆ 仔細(xì)閱讀說明書。

◆ 檢查試劑盒標(biāo)簽上的有效期。如果超過有效期,請(qǐng)勿使用。

◆ 按說明書確定所有試劑齊全(數(shù)量、體積)。

◆ 標(biāo)本制備要規(guī)范,每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者,注意低溫保存。

◆ 準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品,(比如移液器,試管,清洗器,酶標(biāo)儀)。

◆ 按說明書將所用試劑平衡至室溫,根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量。

◆ 檢查試劑盒內(nèi)每種試劑的貯存條件,保證所有試劑均按照試劑盒內(nèi)說明書推薦的條件存儲(chǔ)。

◆ 檢查不穩(wěn)定或者變質(zhì)的試劑溶液(比如沉淀或變色)。有些試劑,比如標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液或者檢測(cè)稀釋液,可能在設(shè)計(jì)時(shí)就含有沉淀物。所有試劑在滴入酶標(biāo)板之前,必需充分混勻。而由于沉淀物的特性,在加入酶標(biāo)板之前,必需不停攪拌。

◆ 保證充分的孵育時(shí)間和溫度。

◆ 切勿使用不同生產(chǎn)批號(hào)的試劑取代現(xiàn)有試劑或混合現(xiàn)有試劑。

◆ 在混合或溶解蛋白溶液時(shí),避免泡沫產(chǎn)生。

◆ 在實(shí)驗(yàn)開始之前,安排好實(shí)驗(yàn)流程。

◆ 在實(shí)驗(yàn)開始之前,清潔工作臺(tái)。

◆ 若有問題,應(yīng)與我公司或代理商的技術(shù)支持聯(lián)系  

結(jié)果判斷:

1. 每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值減去空白孔的OD值后作圖,如設(shè)置復(fù)孔,則應(yīng)取其平均值計(jì)算。以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。亦可以O(shè)D值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為縱坐標(biāo),繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2. 推薦使用專業(yè)的曲線制作軟件,如curve expert 1.3或1.4,在軟件界面既可根據(jù)樣品OD值,由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,乘以稀釋倍數(shù);亦可將樣品的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線的擬合方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。

3. 若樣品OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限,應(yīng)適當(dāng)稀釋后重測(cè),計(jì)算濃度時(shí)應(yīng)乘以稀釋倍數(shù)。

大鼠Sema3A檢測(cè)試劑盒靈敏度、檢測(cè)范圍、特異性和重復(fù)性:

●靈敏度:見說明書

●檢測(cè)范圍:可根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)要求定做。

● 重復(fù)性:板內(nèi),板間變異系數(shù)均<10%。

● 特異性:可檢測(cè)重組或天然的大鼠Sema3A,且與其它相關(guān)蛋白無交叉反應(yīng)。

操作概要

1. 在各孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品各 100μL, 37℃孵育 90 分鐘

2. 倒去孔內(nèi)液體,加入 100μL 生物素化抗體工作液,37℃孵育 60 分鐘

3. 洗滌 3 次

4. 加入 100μL 酶結(jié)合物工作液, 37℃孵育 30 分鐘

5. 洗滌 5 次

6. 加入 90μL 底物溶液, 37℃孵育 15 分鐘左右

7. 加入 50μL 終止液,立即在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)量 OD 值

8. 結(jié)果計(jì)算  

問題分析

若實(shí)驗(yàn)效果不好,請(qǐng)及時(shí)對(duì)顯色結(jié)果拍照,保留所用板條及未使用試劑,并妥善保存,然后

聯(lián)系我公司技術(shù)支持為您解決問題。

我是按照實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行測(cè)定的,但是沒有任何信號(hào),為什么?

◆ 對(duì)于使用HRP底物的比色測(cè)定,終止液的加入會(huì)使底物變色。而說明書推薦的波長(zhǎng)就是*適波長(zhǎng)。

◆ 通過輕拍酶標(biāo)板的邊緣充分混合孔內(nèi)試劑。加入終止液的時(shí),顏色由藍(lán)變黃(如果是HRP

底物)。如果加終止液之前孔內(nèi)試劑沒有混合,則底物顏色變綠。

◆ 可能加入試劑的順序錯(cuò)誤。

◆ 加入底物溶液以后不要清洗酶標(biāo)板。

◆ 在連續(xù)稀釋時(shí)確定已經(jīng)加入標(biāo)準(zhǔn)品。

◆ 如果底物系統(tǒng)中有兩個(gè)成分,則必需混合均勻。

◆ 確定酶標(biāo)儀的使用和操作正確。

◆ 確定試劑,標(biāo)準(zhǔn)品,樣品都正確配制并按照說明滴加無誤。

◆ 對(duì)于高敏感性試劑盒,確定使用的底物和放大劑都正確稀釋。

 

 

滬公網(wǎng)安備 31011702004356號(hào)

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